Зачем может потребоваться сдача крови на ПЦР

Надежный, быстрый и высокочувствительный метод диагностики, способный идентифицировать возбудителей различных инфекционных заболеваний, выявляя их генетический материал (ДНК или РНК) в пробах, полученных от обследуемого пациента, называется полимеразной цепной реакцией (ПЦР).

Анализ ПЦР (полимеразной цепной реакции) был впервые разработан американцем Кэри Мюллисом в 1983-м году. Методика была сразу же запатентована компанией "Цетус Корпорейшн". В 1992-м патент был продан компании "Хоффман-Ля Рош", но в итоге оказалось, что многие ученые из разных стран вели одновременно работу в этом направлении, внесли свой вклад в разработку новой технологии выявления возбудителей инфекционных заболеваний.

В свое время многими учеными метод ПЦР был назван «революционным» прорывом для вирусологов и инфекционистов, дав возможность получить результат анализа за считанные часы, а не ожидая информации днями и неделями, как это требовалось ранее.

Суть метода ПЦР

Суть метода полимеразной цепной реакции заключается в многократном увеличении самых ничтожных концентраций фрагментов ДНК в любой пробе. Для этого:

1. В специальный реактор помещается небольшое количество биологического материала в пробирке (слюна, кровь, моча, выделения из половых органов), в котором могут находиться фрагменты ДНК микроорганизма.
2. К этому материалу добавляются специальные ферменты, которые связываются с ДНК микроорганизма, синтезируя ее копию.
3. Реакция копирования ДНК проходит по принципу цепной реакции, в несколько этапов:
   • из 1 молекулы ДНК образуются 2 новые молекулы;
   • второй этап - из имеющихся 2 молекул образуются 4 новые;
   • после ряда циклов, вместо 1 копии ДНК, готовы для исследования несколько сотен/тысяч копий.

Достаточное число копий ДНК вируса/микроорганизма легко поддается исследованию. Полученный результат сравнивается с базой данных, в которой имеется информация о строении ДНК различных микробов, неважно, то ли проводится анализ ПЦР на ИППП (инфекции передающиеся половым путем), то ли на гепатит или туберкулез, вирусы, даже ВИЧ.

Преимущества ПЦР перед иными способами диагностики

К явным преимуществам, которые демонстрирует анализ ПЦР на ИППП, надо отнести точность и избирательность полученных результатов, поскольку реактив при ПЦР подходит к ДНК инфекции в точности, как ключ к замку - на каждый возбудитель заболевания имеется свой реактив. Тот же бакпосев признается не менее чувствительным методом, известным уже давно, отработанным до мелочей, пусть и более хлопотным. Однако по срокам выполнения посев заметно проигрывает молекулярным методам диагностики.

Даже тот факт, что для каждого возбудителя нужна своя питательная среда, а для хламидий, к примеру, она очень дорогая, нельзя рассматривать как решающий фактор, определивший распространенность анализа, в то как от пациента требуется лишь сдать соскоб из уретры на ПЦР.

Многие специалисты указывают на ряд факторов, отмечая, чем отличается бак посев от ПЦР, поскольку бактериологическое лабораторное исследование всегда «показывает» только живого возбудителя, демонстрируя эффективность проведенного лечения. Даже использование иммуноферментного анализа (ИФА), когда в крови определяются специфические антитела или антигены на определенный возбудитель, не может гарантировать 100% объективность информации.

Как оказалось, существующее отличие ИФА от ПЦР не дает возможность признать иммуноферментный метод лучшим, поскольку те же самые хламидии вызывают ответную реакцию иммунной системы человека в виде выработки антител IgA,IgM,IgG, а последнии сохраняются в крови в течение года после полного излечения, что и обуславливает неоднозначные, на первый взгляд, результаты лабораторных исследований - ИФА положительный ПЦР отрицательный (антитела имеются, а ДНК микроорганизма нет, т.к. пациент уже излечен).

К тому же, ослабленная сильными инфекциями иммунная система может с запозданием начать вырабатывать определяемые ИФА антитела либо вообще их не вырабатывать. В этом случае результаты анализа звучат следующим образом - ИФА отрицательный ПЦР положительный, что свидетельствует о начале заболевания, хоть и нет еще клинико-лабораторных его проявлений.

Пациентам предлагается сдать кровь на ПЦР, поскольку данный метод имеет следующие преимущества перед существующими технологиями определения скрытых до поры инфекций:

1. Высокая чувствительность метода. Имея всего несколько молекул ДНК микроорганизма, специалисты лаборатории, проводя анализ ПЦР, определяют наличие инфекции, что крайне важно при диагностировании хронических, латентно протекающих патологий. В ряде случаев, когда микроорганизм является некультивируемым иными способами, подобный анализ является единственным объективным методом выявления возбудителя.
2. Для качественного и быстрого исследования подходит любой биологический материал (слюна, кровь, волосы, выделения из половых органов, клетки эпителия).
3. Автоматизированный процесс позволяет получить результаты исследования спустя 4-5 часов. Существует даже наиболее современный метод ПЦР real time, когда визуальная оценка результатов ПЦР, для чего применялся метод электрофореза, сменяется флуоресцентными методами детекции продуктов амплификации. В результате применения модифицированного метода анализа - получение и интерпретация результатов анализа становится проще, быстрее, да и надежнее.
4. Несмотря на универсальность метода, на его основе разрабатываются и более специализированные технологии, благодаря чему при исследовании урогенитального тракта женщин опытный врач не задумывается о том, какое лабораторное обследование назначить - фемофлор или ПЦР. Именно фемофлор, базирующийся на использовании полимеразной цепной реакции, признается лучшим методом, благодаря которому ПЦР диагностика урогенитальных инфекций дает точную качественную и количественную картину условно-патогенной и нормальной картины женского урогенитального тракта в режиме «реального времени».
5. Врач получает возможность определить несколько видов возбудителей при сдаче пациентом лишь 1 пробы материала для анализа. Это ускоряет процесс диагностики заболевания, кардинально снижает материальные затраты на лабораторные исследования.
6. Количественный анализ ПЦР также признается важным фактором, определяющим достоинства проведения диагностики скрытого заболевания с помощью метода полимеразной цепной реакции - для оценки эффективности лечения многих хронических инфекций.

Существуют однако и особенности, чем отличается ПЦР качественный от количественного, поскольку от специалиста требуются дополнительные манипуляции направленные на своевременное завершение полимеразной цепной реакции.

В противном случае, на конечной фазе насыщения, когда полученных в результате ПЦР копий становится слишком много, ограничивающими звеньями реакции становятся как субстраты (дезоксирибонуклеозидтрифосфаты), так и сам фермент. Ведь для его молекул становится слишком много матричной ДНК в виде продуктов полимеразной цепной реакции. В этих условиях завершение очередного этапа ПЦР уже не сопровождается удвоением количества копий ДНК/РНК, но происходит нивелирование небольших количественных отличий между ранними и поздними пробами, хоть на начальных этапах ПЦР достаточно четко выявляются различия.

Вышеизложенное свидетельствует, что оснащение лаборатории, уровень подготовки специалистов, должны соответствовать установленным стандартам.

Ведь для количественного определения микроорганизмов требуются даже праймеры либо дезоксирибонуклеозидтрифосфаты, меченные флуоресцентной или даже радиоактивной меткой. Требования к оснащению и поддержанию санитарно-гигиенического режима в ПЦР-лабораториях не уступают хирургической операционной. ПЦР-лабораторию, в соответствии с «Методическими указаниями МУ 1.3.1888-04» оборудуют водопроводом, канализацией, электричеством и отоплением. Все помещения ПЦР-лаборатории обеспечивают достаточным естественным и искусственным освещением, выделяют при этом:

• зону приема, регистрации, разбора и первичной обработки материала;
• зону выделения ДНК/РНК в отдельном помещении;
• зону приготовления реакционных смесей и проведения ПЦР;
• зону детекции продуктов амплификации.

Создаваемая приточно-вытяжная либо вытяжная вентиляция, хоть и допускается установка кондиционеров, предполагает 5-6 м³/час притока воздуха и 6-7 м³/час на вытяжку. При нарушении правил обустройства ПЦР-лаборатории результаты анализа могут быть ложноположительными.

Как правильно подготовиться к анализу?

Чтобы получить достоверные результаты ПЦР исследований, рекомендуем провести предварительную подготовку к такой диагностике:

1. Перед сдачей слюны необходимо воздержаться от приема пищи, а также лекарств за 4 часа до проведения забора материала. Непосредственно перед самой процедурой необходимо прополоскать рот кипяченой водой. Эти же правила следует соблюдать и при взятии образца для анализа с внутренней поверхности щеки. Проведя полоскания ротовой полости необходимо немного помассировать кожу в области щеки для выделения секрета железы.
2. Моча для анализа обычно собирается в домашних условиях. Правильная подготовка к сдаче ПЦР мочи заключается в следующем - необходимо провести тщательный туалет половых органов, а затем в стерильный пластиковый контейнер собирается 50-60 мл средней порции мочи. Для обеспечения чистоты материала подготовка к анализу ПЦР для женщин предполагает введение тампона во влагалище. Мужчинам следует обязательно открыть головку полового члена. Нельзя сдавать материал для ПЦР анализа в период менструальных выделений.
3. Перед сдачей спермы – следует воздержаться от полового акта в течение 3 дней до забора материала. Советуем отказаться от посещения сауны, даже принятия горячей ванны, употребления острой пищи и алкоголя. А за 3 часа до анализа нужно помочиться, чтобы в последующем воздержаться от мочеиспускания.
4. При сдаче урогенитального мазка – женщинам и мужчинам необходим отказ от половой жизни в течение 3 дней.
5. Нельзя проводить ПЦР после антибиотиков - за 2 недели до анализа следует отказаться от приема антибактериальных препаратов.
6. За неделю до анализа - необходимо прекратить использование интимных мазей, гелей, влагалищных свечей и спринцевание. За 3 часа до исследования - воздержаться от мочеиспускания. Во время менструации забор не проводится - спустя 3 дня после прекращения кровяных выделений можно брать урогенитальный мазок для полимеразной цепной реакции.
7. ПЦР во время беременности имеет свои особенности. Поскольку в период вынашивания любая инфекция может причинить вред плоду, особенно вызываемая ИППП, настоятельно рекомендуется на раннем сроке беременности пройти обследование, чтобы установить наличие либо отсутствие патологии, которая может привести к выкидышу, преждевременным родам. Сдается анализ при постановке на учет, при сроке беременности - до 12 недель.